كيفية جمع وحفظ عينات الدم؟

ينقسم الدم الكامل إلى الدم غير المتخثر والمضاد للتخثر وفقًا لظروف التجميع. في الوقت نفسه ، يسمى السائل الأصفر العلوي الذي لم يتم فصله عن طريق التخثر المصل ؛ يسمى السائل الأصفر العلوي الذي تم فصله عن طريق التخثر البلازما. تعد درجة حرارة التخزين ووقت العينة ، وخطوات طريقة المصل والبلازما وفصل الخلايا أيضًا عوامل مهمة تؤثر على نتائج الاختبار قبل التحليل. بعد جمع الدم ، تحتاج خلايا الدم إلى استهلاك بعض العناصر الغذائية بسبب التمثيل الغذائي ، لذلك عند قياس هذه المكونات ، تحتاج إلى الطرد المركزي في الوقت المناسب لفصل مكونات الخلية. الاستعدادات الفردية قبل جمع الدم ، مثل مدة وقت الصيام ، وتحديد موقف المريض أثناء جمع الدم ، وما إلى ذلك ؛ وقت تطبيق Tourniquet ، التسريب ، التمرين ، اختيار مضادات التخثر والمثبت ؛ سوف تؤثر معالجة العينة على مستوى بعض مؤشرات الكشف. لذلك ، يجب توحيد عملية جمع العينات لتقليل الأخطاء المحلية.

1. لا تجمع المصل عن طريق التخثر:

1. أنبوب تجميع الدم الخالي من الإضافة الأحمر: يستخدم مبدأ تخثر الدم الطبيعي لتخثر الدم ، ويتم ترسيب المصل بشكل طبيعي ثم الطرد المركزي. يستخدم بشكل أساسي للكيمياء الحيوية في الدم (وظيفة الكبد ، وظائف الكلى ، إنزيمات عضلة القلب ، الأميليز ، إلخ) ، الشوارد (البوتاسيوم في الدم ، الصوديوم ، الكلوريد ، الكالسيوم ، الفوسفور ، إلخ) ، وظيفة الغدة الدرقية ، اختبار المخدرات ، اختبار العلامات الورم ، ورم ، اختبار علم المناعة في الدم.

2. جمع مع أنابيب التخثر: استخدم أنابيب التخثر الأزرق. بشكل عام ، يُسمح بالوقوف لمدة نصف ساعة إلى ساعة واحدة ، ويتم الطرد المركزي مباشرة للاستخدام أو التخزين ، وغالبًا ما يتم استخدامه في الكيمياء الحيوية الطارئة.

3. مجموعة من أنابيب جمع الدم التي تحتوي على هلام منفصل وتخثر: جدار أنبوب جمع الدم هو السيليكون ومغلفة مع تخثر لتسريع التخثر الدمي وتقصير وقت الكشف. يضاف هلام الفصل إلى أنبوب الحيوانات الأليفة ، ويحتوي جل الانفصال على تقارب جيد مع أنبوب الحيوانات الأليفة ، والذي يعمل بالفعل كحاجز. عادة ، يفصل هلام الفصل المكون السائل (المصل) والمكون الصلب (خلايا الدم) في الدم حتى في الطرد المركزي العادي. تشكل فصل شامل وتراكم حاجز في أنبوب الاختبار. بعد الطرد المركزي ، لا يتم إنتاج أي قطرات زيت في المصل ، تستخدم بشكل رئيسي في الكيمياء الحيوية في الدم (وظيفة الكبد ، وظيفة الكلى ، إنزيمات عضلة القلب ، الأميليز ، إلخ) ، الشوارد (البوتاسيوم في المصل ، الصوديوم ، الكلور ، الكالسيوم ، الفوسفور ، إلخ) ، إلخ. وظيفة الغدة الدرقية ، الكشف عن المخدرات ، اختبار الإيدز ، علامات الورم ، علم المناعة في الدم.

مزايا استخدام أنابيب التخثر:

1. يمكن أن يسرع تخثر خلايا خلايا الدم الحمراء. 2. استخدام هلام الانفصال لفصل المصل بشكل فعال وتجنب انحلال الدم بشكل أفضل.

عيوب جمع المصل:

1. يجب أن تكون خلايا الدم الحمراء متخثرًا تمامًا ، والتي تستغرق وقتًا طويلاً ؛ 2. مصل صغير نسبيًا ، ويمكن لمضاد الدم 1 مل من الدم بالكامل ، ويمكن فصل 0.2-0.3 مل فقط من المصل.

2. مجموعة مضادة للتخثر من البلازما: يتم جمع الدم الكامل المضاد للتخثر ، ومقلوب بلطف ، ومضاد للتخثر بالكامل ، ويمكن فصل البلازما مباشرة عن طريق الطرد المركزي للاستخدام أو الحفاظ عليه.

وفقًا لخصائص الأداء لمضادات التخثر المختلفة ، يتم اختيار مضادات التخثر المناسبة. مضادات التخثر شائعة الاستخدام في المختبر هي ملح الهيبارين ، وبلاينيديامين رباعي السترات والسيترات الصوديوم.

1 ، مضادات التخثر الهيبارين: لن تتداخل مضادات التخثر الأكثر استخدامًا ، في ظل الظروف العادية مع المؤشرات ذات الصلة ، ونسبة مضادات التخثر كبيرة (مضادات التخثر: الدم الكامل = 1:30) ، لا يوجد تخفيف من الدم. الهيبارين هو السكاريد المخاطي الذي يحتوي على مجموعة كبريتات سالبة سلبًا تعزز تعطيل البروتياز السيريني من خلال مضادات الثرومبين الثالث ، وبالتالي منع تكوين الخثارة ومنع مختلف الآثار المضادة للتخثر مثل تجميع الصفائح الدموية. التأثير.

تُستخدم أنابيب الهيبارين عمومًا للكشف عن التغيرات الكيميائية الحيوية والهيمورهيولوجية وهي الخيار الأفضل للكشف عن المنحل بالكهرباء. لا ينبغي استخدام الصوديوم الهيبارين عند اكتشاف أيونات الصوديوم في عينات الدم لتجنب التأثير على نتائج الاختبار. كما أنه لا يمكن استخدامه لعد الكريات البيض والفرز لأن الهيبارين يسبب تجميع الكريات البيض. على الرغم من عدم وجود فروق ذات دلالة إحصائية في تركيزات الإلكتروليت التي تم الحصول عليها عن طريق التخثر مع أملاح الهيبارين الثلاثة ، إلا أن الهيبارين الليثيوم كان هو الأفضل. ويرجع ذلك أساسًا إلى أن الصوديوم الهيبارين يزيد من قيمة الصوديوم والأمونيوم الهيبارين لزيادة قيمة الأمونيا في الدم (تقاس بواسطة طريقة اليوريز). يمكن للهيبارين أن يمنع بعض إنزيمات الأدوات الشائعة في علم الأحياء الجزيئي ، مثل إنزيمات التقييد والإنزيمات Taq ، مما يؤثر على نتائج تجارب PCR. يمكن استخدام بعض الطرق للتخلص من التأثير المثبط للهيبارين ، مثل استخدام الهيباراناز أو الغسيل مع المخزن المؤقت 2 أو أكثر بعد سرطان الدم. ومع ذلك ، لا يزال العديد من التجريبيين مترددين في استخدام الهيبارين كمضاد للتخثر في تجارب البيولوجيا الجزيئية.

2 ، مضادات تخثر الدم EDTA: يمكن أن يربط حمض الإيثيلين Diamine رباعي الأسيتيك حمض الأميني بوبوكسيليك أيونات الكالسيوم بشكل فعال في الدم. سيقوم الكالسيوم بإزالة الكالسيوم من موقع التفاعل ومنع وإنهاء الذاتية أو الخارجية. مصدر عملية تخثر الدم ، وبالتالي منع تخثر الدم ، له تأثير أقل على تراص خلايا الدم ومورفولوجيا خلايا الدم من مضادات التخثر الأخرى ، لذلك أملاح EDTA (2K ، 3K ، 2NA) تستخدم عادة كمضادات التخثر. يتم استخدامه لعلم الدم العام ، ولكن ليس للتخثر ، والعناصر النزرة ، و PCR. نظرًا لأن EDTA يخلط أيونات المعادن الثقيلة ، فإن بعض الإنزيمات الجزيئية الجزيئية ذات الأيونات المعدنية ستخسرها عند استخدام هذا مضادات التخثر. على وجه التحديد ، استنادًا إلى المقاييس التي يقاسها العميل ، كان من الضروري استخدام EDTA لتضاد التخثر.

3. سترات الصوديوم: سترات الصوديوم بمثابة مضاد للتخثر من خلال العمل على أيونات الكالسيوم في عينات الدم. توصي NCCLS بنسبة مضادات التخثر بنسبة 3.2 ٪ أو 3.8 ٪ للدم. إنه 1: 9 ويستخدم بشكل رئيسي في نظام التحلل الفيبيري (وقت البروثرومبين ، وقت الثرومبين ، وقت التخثر الجزئي المنشط ، الفيبرينوجين). يجب إيلاء الانتباه إلى كمية الدم التي تم جمعها لضمان دقة نتائج الاختبار ، ويجب أن يتم قلب الدم بلطف وخلطه من 5 إلى 8 مرات بعد أخذ العينات. نظرًا لأن نسبة مضادات التخثر صغيرة (مضادة للتخثر: الدم الكامل = 1: 9) ، فإن الدم لديه تخفيف معين ولا ينصح به عمومًا.

الاحتياطات لاختيار مضادات التخثر:

1. يجب أن تكون كمية مضادات التخثر المضافة في كل عينة هي نفسها ، ويجب أن تكون كمية الدم الكامل التي تم جمعها متسقة قدر الإمكان.

2. تأكد من عكس الدم كله المضاد للتخثر بلطف. مضادات التخثر الكاملة ، لمنع جزء من الدم من الاتصال بمضادات التخثر والتسبب في التخثر

3. جمع المزيد من البلازما من الدم الكامل المضاد للتخثر (0.4-0.5 مل من البلازما يمكن فصلها من 1 مل من الدم المضاد للتخثر) ؛

4. بعد تجميد البلازما التي تم جمعها وتخزينها ، قد يحدث تعكر التلبد أثناء عملية الذوبان ، ويمكن أن يتم الطرد المركزي لإزالة التعكر لتحديده إذا لزم الأمر. بعد التجميع ، لا يتم تحديد المصل والبلازما في أي وقت ويمكن تخزينه على الفور. كلما انخفضت درجة الحرارة ، كان ذلك أفضل. إذا لم يتم تكرار درجة الحرارة في الوسط ، فيمكن تخزينها أقل من -20 درجة مئوية لمدة شهر واحد وتحت -70 درجة مئوية لمدة 3 أشهر.

ثلاثة ، سرعة الطرد المركزي المستخدمة لجمع المصل والبلازما: عند فصل المصل أو البلازما ، وفقًا للأنواع المختلفة ، تختلف سرعة الطرد المركزي أيضًا ، وهي سرعة الطرد المركزي الموصى بها هي: 1 ، الفئران: عمومًا 1000 إلى 1500 دورة في الدقيقة ، الطرد المركزي لمدة 8 -10 دقائق؛ 2 الفئران ، الأرانب: عمومًا 2000-2500 دورة في الدقيقة ، الطرد المركزي لمدة 8-10 دقيقة ؛ 3 ، الناس: عام 2500-3000 دورة في الدقيقة ، الطرد المركزي لمدة 8-10 دقيقة. رابعا ، تأثير العوامل عالية الدهون والانحلال:

تأثير انحلال الدم: يعتمد تأثير انحلال الدم على بعض المؤشرات التي تم اختبارها ليس فقط على الطريقة المستخدمة ، ولكن أيضًا على الأداة التحليلية المستخدمة. يمكن أن تقضي طريقة قياس الطول الموجي المزدوج على تداخل اللون للهيموغلوبين إلى حد ما ، لكنها لا يمكن أن تقضي تمامًا على تداخل الهيموغلوبين ، خاصةً عندما يتفاعل الهيموغلوبين مع الكاشف المستخدم. بشكل عام ، لم يتداخل انحلال الدم المعتدل بشكل كبير مع تحديد معظم مؤشرات الكيمياء السريرية.

قد يكون لانحلال الدم الشديد تأثيران: (1) عندما يكون تركيز المكون الذي تم اختباره أعلى في PBC منه في البلازما ، فإن نتائج الفحص أعلى ؛ (2) عندما كان تركيز الكسر الذي تم اختباره في RBC أقل من تأثير البلازما ، تم تخفيف الكسر الذي تم اختباره قليلاً.